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免疫组化(IHC)技术服务
点击次数:1239 更新时间:2017-11-05 【打印此页】 【返回
免疫组织(细胞)化学是应用抗原和抗体特异性结合的免疫学原理及组织化学显色原理相结合的实验技术。因为抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性,所以先将组织或细胞中的某种化学物质提取岀来,以此作为 抗原或半抗原,通过免疫后获得特异性抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的相应抗原物质,反之亦然。而抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的,因此须借助于组织化学的显色方法将抗原抗体反应的部位显示出来,从而达到对组织切片标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量的研究。组织中凡是能作抗原或半抗原的物质,如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。



本公司采用SP法免疫组化染色方法,具体步骤如下:
1.石蜡切片烘箱烤片、脱蜡和水化后,用PBS<pH7.4>冲洗3次,每次3min。并对组织进行抗原修复(枸椽酸盐缓冲液<pH6.0>、微波高火5min、两次,第二次修复前需冷却至室温)。
2.每张切片滴加过氧化酶阻断溶液,室温下孵育10min以阻断内源性过氧化物酶的活性。用PBS冲洗3次,每次 3min。
3.除去PBS液,每张切片滴加正常非免疫动物血清,室温下孵育10min。
4.除去血清,每张切片滴加第一抗体,室温下孵育60min或4℃过夜。PBS冲洗3次,每次3min。
5.除去PBS液,每张切片滴加生物素标记的第二抗体,室温下孵育1Omin后,用PBS冲洗3次,每次3分钟。
6.除去PBS液,每张切片滴加链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液,室温下孵育10min后,用PBS冲洗3次,每 次 3min。
7.除去PBS液,每张切片滴加新鲜配制的DAB溶液,显微镜下观察3-10min。
8.自来水冲洗,苏木素复染,自来水冲洗返蓝,经梯度酒精脱水干燥、二甲苯透明后,中性树胶封固。 该方法敏感度更高、背景更清晰,特别适用于检测福尔马林固定石蜡包埋组织中低含量的抗原。